由于微生物不斷地吸收、同化營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和排出代謝產(chǎn)物,因此,在發(fā)酵過(guò)程中,發(fā)酵液的ph值是一直在變化的。
為了使微生物能在合適的ph值范圍內(nèi)生長(zhǎng),繁殖,合成目標(biāo)代謝產(chǎn)物,必須嚴(yán)格控制發(fā)酵過(guò)程的ph值,使用發(fā)酵用pH計(jì)能準(zhǔn)確的測(cè)量到ph值。 在微生物生長(zhǎng)和產(chǎn)物生成中,合適ph值與比生長(zhǎng)速率μ、產(chǎn)物比生成速率Qp三個(gè)參數(shù)的相互關(guān)系有四種情況:
首種情況是菌體的比生長(zhǎng)速率μ和產(chǎn)物比生成速率Qp的合適ph都在一個(gè)相似的較寬的范圍內(nèi),這種發(fā)酵過(guò)程易于控制;第二種情況是μ的合適ph范圍很寬,而Qp的合適ph范圍較窄,第三種情況是μ和Qp對(duì)ph的變化都很敏感,它們的合適ph又是相同的;
第二、第三種模式的發(fā)酵ph值應(yīng)嚴(yán)格控制;第四種情況更復(fù)雜,μ和Qp有各自的合適ph值,此時(shí)應(yīng)分別嚴(yán)格控制各自的合適ph,才能優(yōu)化發(fā)酵過(guò)程。
在確定了發(fā)酵各個(gè)階段所需要的合適ph之后,需要采用各種方法來(lái)控制,使發(fā)酵過(guò)程在預(yù)定的ph范圍內(nèi)進(jìn)行。
要使ph控制在合適的范圍內(nèi),應(yīng)首先根據(jù)不同的微生物的特性,不僅要在原始培養(yǎng)基中控制適當(dāng)?shù)膒h值,而且要在整個(gè)發(fā)酵過(guò)程中隨時(shí)檢查ph值的變化情況,并進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)控。
首先,從基礎(chǔ)培養(yǎng)基的配方考慮,通過(guò)平衡鹽類和碳源的配比,穩(wěn)定培養(yǎng)液的ph值,或加入緩沖劑(如磷酸鹽)調(diào)節(jié)培養(yǎng)基初始ph值至合適范圍并使其有較強(qiáng)的緩沖能力。在分批發(fā)酵中,常加入CaCO3中和酮酸等物質(zhì)來(lái)控制ph的變化。
發(fā)酵過(guò)程中,隨著基質(zhì)的消耗及產(chǎn)物的生成,ph值會(huì)有較大的波動(dòng)。因此,在發(fā)酵過(guò)程中也應(yīng)當(dāng)采取相應(yīng)的ph值調(diào)節(jié)和控制方法,主要有以下幾種方法:
?、僦苯友a(bǔ)加酸、堿物質(zhì),如h2SO4、NaOh等。當(dāng)ph值偏離不大時(shí),使用強(qiáng)酸堿物質(zhì)容易破壞緩沖體系,而且會(huì)引起培養(yǎng)液成分發(fā)生水解,故目前已較少使用此方法。
?、谕ㄟ^(guò)調(diào)整通風(fēng)量來(lái)控制ph值。此方法主要是在加多了消泡劑的個(gè)別情況下使用,提高空氣流量可加速脂肪酸的氧化,以減少因脂肪酸積累引起的ph降低。
?、垩a(bǔ)加酸性或堿性鹽基質(zhì),如氨水、尿素、(Nh4)2SO4等,通過(guò)代謝調(diào)節(jié)ph值。補(bǔ)加性酸堿物質(zhì),既調(diào)節(jié)了發(fā)酵液的ph值,又可以補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),還能減少阻遏作用。補(bǔ)加的方式根據(jù)實(shí)際生產(chǎn)情況而定,可以是直接加入、流加、多次流加等方式。
?、懿捎醚a(bǔ)料方式調(diào)節(jié)ph值。例如,當(dāng)ph值上升至超過(guò)合適值,意味著菌處于饑餓狀態(tài),可加糖調(diào)節(jié),糖的過(guò)量又會(huì)使ph下降。
采用補(bǔ)料的方法可以同時(shí)實(shí)現(xiàn)補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)、延長(zhǎng)周期、調(diào)節(jié)ph和改變培養(yǎng)液的性質(zhì)(如黏度)等幾種目的,特別是那些對(duì)產(chǎn)物合成有阻遏作用的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),通過(guò)少量多次補(bǔ)加可以避免它們對(duì)產(chǎn)物合成的阻遏作用。
發(fā)酵過(guò)程中使用氨水和有機(jī)酸來(lái)調(diào)節(jié)ph時(shí)需謹(jǐn)慎。過(guò)量的氨會(huì)使微生物中毒,導(dǎo)致其呼吸強(qiáng)度急速下降。在需要用通氨氣來(lái)調(diào)節(jié)ph或補(bǔ)充氮源的發(fā)酵過(guò)程中,可通過(guò)監(jiān)測(cè)溶解氧濃度的變化防止菌體出現(xiàn)氨過(guò)量中毒現(xiàn)象。
在實(shí)際生產(chǎn)過(guò)程中,一般可以選取其中一種或幾種方法,并結(jié)合ph的在線檢測(cè)情況對(duì)ph進(jìn)行有效控制,以保證ph值長(zhǎng)期處于合適的范圍內(nèi)。